طراحی و بیان پروتئین نوترکیب از ژن tcpA ویبریوکلرا در وکتور pET32a(+)
نویسندگان
چکیده مقاله:
ززمینه و هدف: ویﺒﺮیﻮﮐﻠﺮا یﮏ ﺑﺎﮐﺘﺮی ﭘﺎﺗﻮژن ﮔﺮم ﻣﻨﻔﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﻋﺎﻣﻞ ﺑﯿﻤﺎری اﺳﻬﺎل اﺳﺖ. یکی از مهمترین عوامل بیماری‌زایی باکتری ویبریوکلرا است؛ پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است که برای کلونیزاسیون باکتری در روده لازم است. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی و بیان پروتئین نوترکیب TcpA بود. روش بررسی: ژن tcpA به لحاظ وجود کدون های نادر بررسی و بهینه‌سازی ژن با استفاده از نرم‌افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. طراحی پرایمر جهت تکثیر ژن سنتزی tcpA انجام گرفت. ژن سنتزی در وکتور pET32a(+) همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب pET32a(+)-tcpA در باکتری E.coli سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان ژن tcpA تحت القای IPTG 1 میلی مولار انجام گردید. بیان پروتئین نوترکیب با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد. یافته‌ها: ژن طبیعی tcpA دارای شاخص انطباق‌پذیری 0/6 بود، در حالی که ژن بهینه‌سازی شده دارای شاخص انطباق‌پذیری 0/9 بود. با بهینه‌سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح بالا به 75% افزایش یافت. آنالیز آنزیمی همسانه سازی ژن tcpA کلون شده در وکتور pET32a(+) را تأیید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 38/6 کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده‌شده و واکنش آن با آنتی‌بادی ضد هیستیدین در وسترن بلات تأیید گردید. میزان پروتئین خالص‌شده 11/533میلی‌گرم در لیتر بود. نتیجه‌گیری: بهینه‌سازی ژنی منجر به بیان بالای پروتئین نوترکیب TcpA شد. با توجه به خاصیت آنتی ژنیسیته tcpA، این پروتئین می‌تواند کاندیدای مناسبی به‌منظور توسعه ایمنی علیه وبا باشد.
منابع مشابه
طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse tra...
متن کاملطراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1
Background and purpose: The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done. Materials and methods: As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separ...
متن کاملطراحی بیوانفورماتیکی و ساخت ژن کایمر دربردارنده زیر واحد B کلراتوکسین و زیر واحد A پیلی ویبریو کلرا
زمینه و اهداف: وبا بیماری خطرناکی است که توسط ویبریو کلرا ایجاد می‌شود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی Toxin-coregulated pili A (tcpA) و توکسین کلرا مهمترین عوامل بیماری‌زایی ویبریوکلرا می‌باشند. زیر واحد B انتروتوکسین Cholera toxin subunit B (ctxB)مسئول اتصال سم به سلول یوکاریوتی است و tcpA که برای کلونیزاسیون باکتری ضروری است، ویژگی‌های ایمونوژنیک دارند. پروتئین‌های کایمر دربردارنده اپی توپ و ادجو...
متن کاملهمسانه سازی و بیان ژن پروتین غشای خارجی 31 (Omp31) باکتری بروسلا ملیتنسیسRev1
بیماری بروسلوز به عنوان یک بیماری مشترک بین انسان و دام به واسطه تکثیر باکتری بروسلا در داخل سلول‌های پستانداران اتفاق می‌افتد. Omp31 یکی از پروتئین‌های غشای خارجی این باکتری می‌باشد که به واسطه نقش مهمی که در تحریک سلول‌های CD8+ T و CD4+ T دارد می‌تواند سبب مهار بیماری بروسلوز گردد. در این بررسی ژن Omp31 به عنوان یکی از ژن های موثر در بیماری بروسلا مورد بررسی مولکولی از نظر آنالیز فیلوژنی و هم...
متن کاملطراحی ژن stxA موتانت (G234E- R170L -A231D) شیگلا دیسانتری و بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب آن
زمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از مهمترین باکتری های بیماریزا‌ی روده‌ای انسان است. شیگاتوکسین (سم این باکتری) با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی می شود. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن علیه آن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در حصول به پروتئین نوترکیب شیگاتوکسین نوع A (stxA) وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی و تعیین جایگاه های مناسب جهش و طراحی ژن سینتتیک زیر واحد ...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 20 شماره 4
صفحات 12- 24
تاریخ انتشار 2018-08
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023